锐谈 「 NAR：Ago—gDNA介导的大肠杆菌基因组编纂工具
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- 发布时间：2023-04-26 10:36
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加州理工大学StephenL Mayo课题组在Nucleic Acids Research发表了一篇题为 “Genome manipulation by guide-directed Argonaute cleavage” 的研究论文，搜求pAgo是否可能成为一种新的DNA引导的基因组编纂工具。
验证CbAgo没关系定向切割大肠杆菌特定的染色体酿成DNA毁伤，并诱导RecBCD依赖性染色体重组的发生，作者一个“Chi-kanDR- Stop Codons -kanDR-kan C-terminus”表达盒插入到大肠杆菌lacZ基因组后，并设计gDNA靶向lacZ。当且仅当CbAgo切割特定DNA，RecBCD分辩Chi位点，削弱其外切酶的切割活性，促进kanDR发生重组删除“Stop Codons”序列，卡那霉素抗性基因回复复兴功能，使菌株具有卡那抗性。作者发现，添加三个或6个Chi位点的表达盒，RecBCD依赖性染色体重组的发生的几率最大。
末端，作者运用CbAgo替换CRISRER-cas9算作反筛体系，与Lambda-Red重组结合。运用CbAgo切割未成功发生同源重组双交换的细胞，使筛选突变细胞的效率升迁了100倍。这些发觉表明了利用pAgo创办DNA导向基因组编纂体系的可以性。
原文链接：https://academic.oup.com/nar/article-lookup/doi/10.1093/nar/gkad188
作者：留白
